În figura 2(a) este ilustrat profilul de emisie de fluorescență folosind blocul de filtre DAPI-FITC și o cultură de celule fibroblaste din piele de căprioară Muntjac indian colorate cu Alexa Fluor 488 conjugat cu faloidină, care se leagă de rețeaua de actină filamentoasă intracelulară. Maximul de absorbție în lumină vizibilă al Alexa Fluor 488 este de 495 nanometri, iar maximul de emisie apare la 519 nanometri în regiunea verde a spectrului. În plus, proba a fost colorată simultan cu DAPI (care vizează ADN-ul din nucleul celular; excitare la 358 nanometri și emisie la 461 nanometri) și MitoTracker Red CMXRos (care vizează mitocondriile; emisie roșie). Observați absența semnalului de la fluoroforul roșu (MitoTracker), dar prezența fluorescenței verzi strălucitoare prezentată de filamentele de actină și semnalul albastru de intensitate ușor mai mică de la DAPI în nucleul celular.
O secțiune subțire de intestin de șoarece colorată cu Alexa Fluor 350 aglutinină de germeni de grâu, o lectină fluorescentă albastră care este specifică pentru mucusul celulelor caliciale, este prezentată în figura 2(b). În plus, specimenul a fost colorat simultan cu Alexa Fluor 568 phalloidin (actina filamentoasă; emisie de 600 nanometri) și SYTOX Green (nuclei; excitare de 504 nanometri și emisie de 523 nanometri). Observați nivelul scăzut al semnalului de la fluoroforul albastru (Alexa Fluor 350), dar fluorescența verde strălucitoare a nucleilor din specimenul de țesut datorată fluorescenței SYTOX Green. Această combinație de filtre de excitație dublă elimină în mod eficient semnalul provenit de la sonda roșie (Alexa Fluor 568).
Figura 2(c) demonstrează intensitatea emisiei de fluorescență de la o cultură de celule epiteliale de cangur de șobolan (PtK2) care au fost marcate imunofluorescent cu anticorpi monoclonali primari anti-bovine alfa-tubulină de șoarece urmați de fragmente Fab de capră anti-șoarece conjugate cu Alexa Fluor 488. În plus, specimenul a fost marcat cu Hoechst 33258, care se leagă selectiv de ADN în nucleul celular, și MitoTracker Red CMXRos (care vizează mitocondriile; fluorescență roșie). Observați colorația verde proeminentă a rețelei intracelulare de microtubuli care se extinde în citoplasmă și emisia albastră de la Hoechst 33258 legată de ADN în nucleu. Celula din porțiunea inferioară a imaginii pare a fi în curs de mitoză în stare de prometafază sau metafază.
Celulele de șoarece elvețian (linia 3T3) marcate imunofluorescent cu anticorpi monoclonali primari anticitocrom oxidază de șoarece urmați de fragmente Fab de capră antișoarece conjugate cu Alexa Fluor 568 sunt ilustrate în figura 2(d). Specimenul a fost, de asemenea, marcat cu mai multe sonde suplimentare, inclusiv lectina Helix pomatia agglutinină (HPA) conjugată cu Alexa Fluor 488 (emisie verde), care se leagă selectiv de glicoproteinele din aparatul Golgi în această linie celulară. Filamentele de actină citoscheletală au fost colorate cu Alexa Fluor 680 (excitare roșie; emisie în infraroșu apropiat), iar ADN-ul nuclear a fost marcat cu DAPI (emisie albastră). Observați colorarea proeminentă în verde a aparatului Golgi și intensitatea fluorescenței albastre observată în nuclee.
Emisia de fluorescență dintr-o secțiune subțire de rinichi de șoarece colorată cu mai mulți (3) fluorofori este prezentată în figura 2(e). Nucleii din secțiunea de țesut au fost țintiți cu sonda de acid nucleic DAPI, care are un maxim de excitație la 358 nanometri și un maxim de emisie la 461 nanometri atunci când este legată de ADN în culturile celulare și în secțiunile de țesut. În plus, secțiunea de criostat a fost, de asemenea, colorată simultan cu Alexa Fluor 488 aglutinină din germeni de grâu (glomeruli și tubuli convoluți) și Alexa Fluor 568 faloidină (actina filamentoasă și marginea în perie). Observați prezența semnalului atât din partea sondei albastre (DAPI), cât și din partea sondei verzi (Alexa Fluor 488), dar absența fluorescenței roșu-portocalii datorate conjugatelor Alexa Fluor 568 în rețelele de actină și de margine de perie.
Emisia de autofluorescență dintr-o secțiune subțire de miez de porumb (Zea mays) este demonstrată în figura 2(f). Autofluorescența endogenă în țesuturile vegetale provine de la o varietate de biomolecule, inclusiv clorofila, carotenul și xantofila. În regiunile de excitație ultravioletă și albastră, clorofila are o bandă de absorbție cu un coeficient de extincție ridicat și produce o cantitate semnificativă de fluorescență atunci când este excitată cu lungimi de undă cuprinse între 350 și 500 nanometri. Pentru țesutul din miezul de porumb ilustrat mai sus, observați prezența intensității de emisie a autofluorescenței în regiunile spectrale albastru și verde, care este caracteristică combinației de filtre de fluorescență DAPI-FITC de la Nikon.
.