Una dintre proprietățile enzimelor care le face atât de importante ca instrumente de diagnostic și cercetare este specificitatea pe care o prezintă în raport cu reacțiile pe care le catalizează. Câteva enzime prezintă o specificitate absolută, adică vor cataliza doar o anumită reacție. Alte enzime vor fi specifice pentru un anumit tip de legătură chimică sau grup funcțional. În general, există patru tipuri distincte de specificitate:
- Specificitate absolută – enzima va cataliza o singură reacție.
- Specificitate de grup – enzima va acționa numai asupra moleculelor care au grupe funcționale specifice, cum ar fi grupele amino, fosfat și metil.
- Specificitatea de legătură – enzima va acționa asupra unui anumit tip de legătură chimică, indiferent de restul structurii moleculare.
- Specificitatea stereochimică – enzima va acționa asupra unui anumit izomer steric sau optic.
Deși enzimele prezintă grade mari de specificitate, cofactorii pot servi multor apoenzime. De exemplu, nicotinamida adenină dinucleotidă (NAD) este o coenzimă pentru un mare număr de reacții dehidrogenazei în care acționează ca acceptor de hidrogen. Printre acestea se numără reacțiile de alcool dehidrogenază, malat dehidrogenază și lactat dehidrogenază.
.