Un argument puternic că noul retrovirus uman XMRV nu este un contaminant de laborator este constatarea că ADN-ul viral este integrat în ADN-ul cromozomal al tumorilor de prostată. De ce constituie acest rezultat o dovadă atât de puternică a infecției virale?
Stabilirea unei copii integrate a genomului viral – provirusul – este o etapă critică în ciclul de viață al retrovirusurilor. ADN-ul proviral este transcris de ARN polimeraza II celulară pentru a produce genomul ARN viral și ARNm-urile necesare pentru a finaliza ciclul de replicare. Fără ADN proviral, replicarea retrovirală nu poate continua.
Pentru a produce ADN proviral, genomul ARN retroviral este convertit într-un ADN bicatenar de către enzima virală transcriptază inversă. Această etapă are loc în citoplasmă. Inserția specifică și efficientă a ADN-ului viral în ADN-ul celulei gazdă este catalizată de o enzimă virală numită integrază. Această enzimă recunoaște și crestează cele două capete ale ADN-ului viral, iar noile capete 3′ sunt apoi unite covalent cu ADN-ul gazdei la crestăturile eșalonate făcute de integrază.
Imaginea de mai jos prezintă unele dintre trăsăturile caracteristice ale integrării retrovirale. A în partea de sus este ADN-ul liniar neintegrat al virusului sarcomului/leucozei aviare produs prin transcriere inversă. La finalizarea integrării, două perechi de baze (AA-TT) sunt pierdute de la ambele terminații, iar un situs țintă de 6 pb în ADN-ul gazdei (roz) este duplicat de o parte și de alta a ADN-ului proviral. Acest situs țintă variază în lungime de la 4 la 6 pb între diferiți retrovirusuri. ADN-ul proviral (mijloc) se termină cu secvența conservată 5′-T G…C A-3′. Provirusul servește ca șablon pentru producerea genomului ARN viral (partea de jos).
Pentru a identifica ADN proviral XMRV, ADN genomic a fost izolat din tumori de prostată, iar ADN-ul a fost amplificat cu ajutorul unui primer care s-a aneantizat în gena virală env, în apropierea LTR din dreapta. Analizele secvențelor nucleotidice ale ADN-urilor amplificate de la 14 9 pacienți diferiți au arătat secvența CA virală așteptată, urmată de ADN uman. Cu toate acestea, celălalt semn cardinal al integrării retrovirale – duplicarea secvențelor de ADN al gazdei care flanchează situsul de integrare – nu a putut fi confirmat, deoarece a fost studiat doar situsul de integrare din dreapta.
Izolarea întregului ADN proviral, inclusiv a ambelor situsuri de integrare flancate, de la pacienții cu cancer de prostată sau sindrom de oboseală cronică ar fi o dovadă suplimentară că XMRV este un virus care infectează oamenii.
.