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Stoccaggio dei tessuti FFPE

I campioni FFPE possono essere conservati in ospedali, biobanche e centri di ricerca. Le strutture di stoccaggio spesso tengono registrazioni di come il tessuto è stato raccolto, le procedure di conservazione e le informazioni demografiche (come, ma non solo: origine, durata, età, etnia, sesso e stadio della malattia) del donatore. Le informazioni demografiche sono un fattore importante nella ricerca e negli studi clinici. I campioni FFPE adeguatamente conservati sono molto preziosi e possono essere conservati a temperatura ambiente per un lungo periodo di tempo.

Applicazioni

I campioni FFPE sono importanti perché sono spesso usati in:

a) Immunoistochimica

I campioni FFPE sezionati sono montati su un vetrino, immersi in una soluzione contenente anticorpi e poi colorati in modo che possano essere visti più chiaramente. Questo metodo è importante per i medici e i ricercatori che cercano la patologia nel tessuto come l’Alzheimer o il cancro.

b) Oncologia

I campioni FFPE sono vitali nel campo dell’oncologia perché i tessuti tumorali hanno morfologie caratteristiche che permettono ai ricercatori di cercare certe proteine. Queste proteine sono poi utilizzate per aiutare nella valutazione del trattamento e della diagnosi.

c) Ematologia

Nello studio del sangue e dei suoi disturbi, i campioni FFPE sono importanti per determinare le anomalie e scoprire le cure. I campioni possono essere utilizzati in studi relativi alla rigenerazione dei tessuti, alla genetica e alla tossicologia.

d) Immunologia

I campioni FFPE da un donatore con malattia autoimmune aiutano a determinare la causa e lo sviluppo della terapia per la condizione.

Complicazioni o limitazioni

Una delle possibili limitazioni del processo di fissazione con formalina è la potenziale denaturazione delle proteine presenti nel tessuto che le rende non rilevabili dagli anticorpi. Per compensare questo problema, sono state sviluppate tecniche di recupero dell’antigene. La tecnica di recupero dell’antigene recupera specificamente DNA, RNA e proteine dai campioni FFPE. Perché questo metodo funzioni, la qualità dei campioni FFPE è critica. C’è anche il problema che non esiste una procedura standard da utilizzare nel trattamento preanalitico come la fissazione e l’isolamento del DNA. Questo significa che piccole differenze come l’uso diverso di strumenti, la manipolazione del campione e la metodologia possono portare a variazioni che influenzano la qualità del DNA e i risultati dello studio. Alcuni dei fattori che sono stati trovati per influenzare i risultati dello studio dai campioni FFPE sono:

1. Registrazione imprecisa del protocollo di fissazione

2. Variazione del tempo di fissazione

3. Temperatura durante fissazione

4. Condizioni di conservazione dei campioni FFPE

Controllo di qualità

Per garantire la massima qualità dei campioni FFPE, coloro che raccolgono e conservano questi campioni dovrebbero:

1. Seguire gli standard etici e legali.

2. Tenere un registro chiaro e accurato dei donatori.

3. Fornire informazioni riguardanti il processo di campionamento e raccolta

4. Essere supervisionati da un patologo autorizzato durante la raccolta dei campioni

5. Avere una catena di custodia completa

6. Lavorare solo con una rete accuratamente selezionata di distributori che forniscono costantemente campioni accurati e di alta qualità

Tessuti freschi congelati

I tessuti freschi congelati sono campioni che vengono conservati utilizzando azoto liquido attraverso un metodo noto come “flash freezing”. Questi campioni sono poi conservati in un congelatore che è impostato ad una temperatura inferiore a -80 gradi Celsius. Il tessuto fresco congelato ha diverse applicazioni rispetto ai campioni FFPE in quanto può essere utilizzato in studi di morfologia nativa o anche in analisi molecolari.

CampioniFFPE Vs. Tessuto Fresco Congelato

FFPE e tessuto fresco congelato hanno i loro pro e contro. Sono due tipi diversi di campioni che hanno usi diversi a seconda dei requisiti della ricerca o dello studio clinico.

1. I blocchi FFPE sono molto duri e possono essere facilmente conservati a temperatura ambiente per decenni senza bisogno di attrezzature speciali, rendendo il tipo di campione di tessuto molto efficiente in termini di costi.

2. C’è un grande archivio di campioni FFPE disponibile per i ricercatori grazie alla facilità di conservazione.

3. I campioni FFPE sono stati usati per decenni rendendoli incredibilmente familiari ai patologi.

4. Il tessuto fresco congelato è molto più adatto all’analisi delle proteine native, alla reazione a catena della polimerasi e al sequenziamento del DNA di prossima generazione.

5. Il tessuto fresco congelato assicura la conservazione di DNA, RNA e proteine native.

6. I tessuti freschi congelati richiedono attrezzature specializzate per la conservazione. Questo significa che guasti meccanici, interruzioni di corrente e disattenzione possono influire sulla qualità dei campioni.

1) Ward T. L’importanza della corretta fissazione in formalina dei campioni FFPE. Personalis. Acceduto il 19/06/2018. https://www.personalis.com/importance-proper-formalin-fixation-ffpe-specimens/

2) Doiron L. 5 regole di controllo della qualità per le banche di tessuti del cancro. Folio Conversant. Acceduto il 19/06/2018. http://www.conversantbio.com/blog/bid/339034/5-Quality-Control-Rules-for-Cancer-Tissue-Banks

3) FFPE vs campioni di tessuto congelati. BioChain. Accessed 6/19/2018. https://www.biochain.com/general/ffpe-vs-frozen-tissue-samples/

4) Cos’è il tessuto FFPE e quali sono i suoi usi. BioChain. Accessed 6/19/2018. https://www.biochain.com/general/what-is-ffpe-tissue/