Po ukończeniu Southwest Texas State University w San Marcos, Texas, Boothe dołączył do zespołu repertuarowego Oregon Shakespeare Festival, z rolami w Henryku IV, część 2 (portretując Henryka IV angielskiego), Troilusie i Kressydzie i innych. Na scenie nowojorskiej zadebiutował w produkcji Ryszarda III w Lincoln Center w 1974 roku. Pięć lat później jego debiut teatralny na Broadwayu nastąpił w głównej roli w jednoaktówce Lone Star, napisanej przez Jamesa McLure.
Boothe po raz pierwszy zwrócił na siebie uwagę w 1980 roku, grając Jima Jonesa w filmie CBS-TV Guyana Tragedy: The Story of Jim Jones. Portret Boothe’a jako przywódcy szalonego kultu spotkał się z uznaniem krytyków. W relacji Time’a na temat produkcji, Boothe został pochwalony: „Jest jeden niezwykły występ. Młody aktor Powers Boothe uchwycił całą charyzmę i zło 'Taty’, Jima Jonesa.” Boothe zdobył za swoją rolę nagrodę Emmy, pokonując weteranów Henry’ego Fondę i Jasona Robardsa. Jak Screen Actors Guild były na strajku w jesieni 1980 roku, był jedynym aktorem do przekroczenia linii pikietażowych do udziału w ceremoniach, mówiąc w tym czasie, „To może być albo najodważniejszy moment mojej kariery lub najgłupszy.”
Boothe portretował Philip Marlowe w serialu telewizyjnym opartym na opowiadaniach Raymonda Chandlera dla HBO w latach 80. Pojawił się w takich filmach jak Southern Comfort, A Breed Apart, Red Dawn, The Emerald Forest, Rapid Fire i Extreme Prejudice, a także w filmach HBO Into the Homeland i By Dawn’s Early Light. Ponadto wystąpił w filmie telewizji CBS z 1990 roku Rodzina szpiegów, w którym zagrał zdrajcę, oficera marynarki wojennej Johna Walkera. Boothe wcielił się w postać Curly Billa Brociusa w przebojowym westernie Tombstone z 1993 roku, nielojalnego starszego oficera armii w Blue Sky (naprzeciwko nagrodzonej Oscarem Jessiki Lange) oraz złowrogiego głównego terrorysty w Nagłej śmierci. Był także częścią dużej obsady filmów Olivera Stone’a Nixon (jako szef sztabu Alexander Haig) i U Turn (jako szeryf miasta).
W 2001 roku zagrał rolę Flawiusza Ajtiusza, rzymskiego generała odpowiedzialnego za powstrzymanie inwazji Hunów w miniserialu telewizyjnym Attyla. Boothe wystąpił w serialu HBO Deadwood jako właściciel domu publicznego Cy Tolliver oraz jako senator Roark w filmie Sin City (2005), a także w jego sequelu Sin City: A Dame to Kill For (2014). Jest głosem jednej z postaci w grze wideo Area 51 z 2005 roku oraz Gorilla Grodd, hiperinteligentnego telepaty nadzorcy w Justice League i Justice League Unlimited. Głosował złoczyńcę, Kane, w 2008 roku w grze wideo Turok.
Był specjalną gwiazdą gościnną na 24, gdzie grał wiceprezydenta Noah Daniels. Powrócił w prequelu do siódmego sezonu, 24: Redemption. Zaraz po przyjęciu roli p.o. prezydenta, Boothe jest widziany przy wyjściu z Air Force Two z F-15 w tle. Boothe zagrał rozbitego pilota F-15 w filmie Czerwony świt. W marcu 2008 roku poprowadził narrację w telewizyjnej reklamie kampanii prezydenckiej senatora Johna McCaina.
W 2012 roku Boothe pojawił się w filmie Jossa Whedona The Avengers w tajnej roli jako cienisty rządowy przełożony S.H.I.E.L.D. W latach 2015-16, powtórzył rolę, teraz nazwaną Gideon Malick, w ABC’s Agents of S.H.I.E.L.D.
Boothe pojawił się w 2012 miniserialu Hatfields & McCoys jako sędzia Valentine „Wall” Hatfield. Boothe został również obsadzony jako Lamar Wyatt w muzycznym serialu dramatycznym ABC Nashville. Boothe użyczył również swojego głosu w Hitman: Absolution, grze wideo z 2012 roku opracowanej przez IO Interactive, wcielając się w postać Benjamina Travisa.