Microhardheid en chemische samenstelling van menselijke tand
Maria del Pilar Gutiérrez-SalazarI, II; Jorge Reyes-GasgaI*
ABSTRACT
Hardheid van menselijke tand, zowel in glazuur als in dentine, is op verschillende plaatsen gemeten met een Vicker’s diamant. In dit werk tonen we aan dat deze waarden bijna constant zijn over de gehele dikte van glazuur en dentine. Indentaties werden uitgevoerd van het buitenste glazuuroppervlak tot de binnenste dentinelaag, door de glazuur-tandbeenverbinding heen, zowel in transversale als longitudinale monsters. De geometrische uniformiteit van de indrukkingen werd gecontroleerd met licht- en met scanning-elektronenmicroscopen, en de chemische samenstelling van de tand werd geanalyseerd met karakteristieke röntgen-energiedispersieve spectroscopie. De hardheidsmetingen lagen in het bereik van 270 tot 360 VHN voor glazuur en 50 tot 60 VHN voor dentine. De cervicale zone in de langsdoorsnede vertoonde de laagste waarde, terwijl in de dwarsdoorsnede de hoogste waarde werd gemeten. Alle hardheidswaarden waren statisch significant. De resultaten van de rondgang geven aan dat het verschil tussen de hardheid van glazuur en dentine niets te maken heeft met het gehalte aan Na, Cl en Mg, maar met het percentage organische en anorganische materialen in glazuur en dentine.
Trefwoorden: microhardheid, chemische samenstelling, menselijke tand, glazuur, dentine
1. Inleiding
Tandglazuur is het meest gemineraliseerde weefsel van het menselijk lichaam. De samenstelling ervan is 96 wt.% anorganisch materiaal en 4 wt.% organisch materiaal en water. In dentine is het anorganisch materiaal goed voor 70 wt.%. Dit anorganisch materiaal bestaat hoofdzakelijk uit een calciumfosfaat dat verwant is aan het hexagonale hydroxyapatiet, waarvan de chemische formule Ca10(PO4)6-2(OH) 1 is. Röntgen-energiedispersiespectroscopie (EDS) analyse van glazuur en dentine wees ook op de aanwezigheid in kleine hoeveelheden van andere elementen zoals Na, Cl en Mg 2.
Menselijke tanden worden tijdens het kauwen blootgesteld aan een verschillende druk van punt tot punt. Daarom is de studie en analyse van hun hardheid van groot belang om te begrijpen hoe kauwspanningen over de tand worden verdeeld, en om te voorspellen hoe spanningen en spanningen veranderen door tandheelkundige restauraties, leeftijd en ziekte. Bovendien kunnen de hardheidswaarden in verband worden gebracht met andere mechanische eigenschappen, zoals de elasticiteitsmodulus en de vloeispanning3,4. Het meten van de hardheid in tand is echter niet eenvoudig. Door de structuren die glazuur2 en dentine vertonen, prisma’s die van de glazuur-dentine junctie (EDJ) naar het oppervlak lopen in het geval van glazuur en een heterogeen composietmateriaal in het geval van dentine5-7, is het gemakkelijk voor te stellen dat hun hardheidswaarden verschillend zijn, zelfs van de ene plaats naar de andere binnenin glazuur en dentine zelf; en dat ze chemisch afhankelijk zouden zijn.
Hardheidsbeproeving, samen met intra-orale modellen, is van groot belang bij de- en re-mineralisatie-experimenten8. De hardheid van menselijke tanden is bepaald met verschillende methoden, waaronder abrasie9, kras10, en indentatietechnieken3,4,11-14. Aangezien in glazuur en dentine aanzienlijke lokale variaties zijn gerapporteerd, werd de voorkeur gegeven aan methoden waarbij gebruik wordt gemaakt van een microkras of micro-indentatie, en het Knoop-diamantindenter wordt vaak gebruikt4,8,13,14. Onlangs werd nano-indentatie met behulp van atoomkrachtmicroscopie gerapporteerd bij hardheidsmetingen van dentine3.
Knoop (KHN) en Vicker (VHN) hardheden hebben ongeveer dezelfde waarde gerapporteerd15. De gemiddelde hardheidswaarde voor glazuur en dentine ligt in het bereik van 270 tot 350 KHN (of van 250 tot 360 VHN) respectievelijk van 50 tot 70 KHN4. De standaardafwijkingen (SD) voor deze waarden vertonen echter brede en significante variaties, hoewel deze variaties bij dentine minder uitgesproken zijn. Zo rapporteerden Craig en Peyton13 voor glazuur een hardheid in het bereik van 344 ± 49 tot 418 ± 60 VHN; Collys et al.14 van 369 ± 25 tot 431 ± 35; Wilson en Love16 van 263 ± 26 tot 327 ± 40. De microhardheid van het occlusale glazuur varieerde van 359 tot 424 VHN, en die van het cervicale glazuur van 227 tot 342 VHN14. Deze variaties kunnen worden veroorzaakt door factoren zoals histologische kenmerken, chemische samenstelling, prepareren van het preparaat, en belasting en afleesfout in de lengte van de inkeping (IL).
In gezond menselijk glazuur werd gerapporteerd dat de hardheidswaarden, het mineraalgehalte, en de dichtheid geleidelijk afnemen van het buitenoppervlak naar de EDJ18-22. Meer specifiek vonden Kodaka et al.19 een matige correlatie tussen de Vicker hardheid en de P concentratie in glazuur, maar een lage correlatie met Ca. Zij gaven aan dat VHN-waarden, Ca en P-percentage significant afnamen in de buitenste, middelste en binnenste glazuurgebieden. Andere studies11,19 meldden dat het buitenste glazuuroppervlak harder is dan het binnenste, en dat de hardheid voortdurend afneemt van de buitenrand tot aan EDJ. Gustafson en Kling21 stelden voor dat de verschillen in hardheid in glazuur veroorzaakt kunnen worden door variaties in de richting van de inkepingen in één tanddoorsnede. Enkele andere studies13 hebben echter wel enig verschil gevonden, slechts lichte aanwijzingen dat glazuur harder is in de cusp en het buitenoppervlak dan in de cervicale rand of EDJ, maar het verschil was kleiner dan de gerapporteerde SD, en dus kan geen definitieve uitspraak worden gedaan.
Hardheidsgetallen gemeld voor dentine variëren ook. Vanwege de grotere omvang van de indrukking in verhouding tot de dentinemicrostructuur, kan deze variatie te wijten zijn aan de verschillen in de dentinale tubulaire dichtheid op verschillende plaatsen. Kenney et al.3, die een aangepaste atomaire-krachtmicroscoop gebruikten om de hardheid van dentine te meten, gaven aan dat gehydrateerd peritubulair dentine een hardheid heeft binnen het bereik van 2,2 tot 2,5 GPa onafhankelijk van de locatie, terwijl in intertubulair dentine deze hardheid wel afhankelijk was van de locatie, en wel significant groter in de buurt van de EDJ (waarden van 0,49 tot 0,52 GPa) dan in de buurt van de pulpa (van 0,12 tot 0,18 GPa).
Een andere parameter waar rekening mee moet worden gehouden is tijd. Er werd gerapporteerd dat in menselijke tand de hardheidsindentaties na verloop van tijd herstelden13,22. Over het algemeen is echter weinig bekend over de manier waarop de grootte van deze inkepingen met de tijd verandert. Aangezien glazuur een vrij bros materiaal is, lijkt de tijdsafhankelijkheid van een indrukking zeer klein of verwaarloosbaar. Maar in dentine vonden Herkstroter et al.22 dat de indrukkingen ontspannen (kleiner worden) over een periode van één dag; daarna veranderen de indrukkingen statistisch niet meer. Een verklaring voor het ontspannen van de indrukkingen zou kunnen liggen in de verschillen in de inhoud van de organische matrix en/of in de hechting tussen minerale en organische matrix.
Zoals men kan zien, zijn er te veel parameters betrokken bij de analyse van de hardheid van menselijke tanden; daarom verkrijgen wij in dit werk nauwkeurige Vickers hardheidswaarden (met minimale SD) voor glazuur en dentine in gezonde tanden. Wij zorgden voor de methode van monstervoorbereiding, de chemische samenstelling langsheen de tand, en de relatieve oriëntatie van het indringlichaam met de glazuurprisma’s en dentine tubuli om de parameters die de hardheidsmeting statistisch beïnvloeden te identificeren en te controleren. Vickers hardheidsindentaties werden gemeten en geanalyseerd met lichtmicroscopie (LM) en scanning elektronen microscopie (SEM).
2. Experimentele procedure
Zeven volgroeide, gezonde premolaren, vers geëxtraheerd om orthodontische redenen, werden ingebed in zelfhardende hars (Fig. 1). De ingebedde tanden werden transversaal of longitudinaal doorgesneden (Fig. 1: a, A2) met behulp van de diamantschijffrees Whiler Mod. Cutto-1. Drie tanden werden parallel aan het occlusale oppervlak doorgesneden, waarbij sneden werden gemaakt op 0,5 mm van de cuspide, 1,5 mm in de cuspide, in de middelste derde, en de cervicale derde (Fig. 1: c, d, e). De andere werden bucolinguaal doorgesneden, loodrecht op de mesiodistale as van de tand (Fig. 1: A1).
Een van de factoren die de hardheidsmeting beïnvloeden is het prepareren van het preparaat, omdat een gekanteld of niet vlak oppervlak een te grote IL en dus een kleinere VHN waarde zou opleveren. Daarom is het produceren van een vlak oppervlak in de preparaten cruciaal in deze analyse. Met dit in gedachten, werden de preparaten gepolijst met siliciumcarbide papier van nr 1200 tot 4000, op een progressieve manier, met water. Het laatste polijstwerk werd gedaan met 0.05 polijstaluminiumoxide in een laagtoerige metallurgische polijstmachine Buehler, mod. Minimet, met lichte belasting van het preparaat. Daarna werden de monsters gereinigd door drie perioden van 5 min elk met gedestilleerd water binnen op ultrasone reiniger Bransonic mod. 52.
Vicker hardheidsmetingen werden uitgevoerd met een micro-hardheidsmeter Matsuzawa mod. MHT2 met een vierkant gebaseerd diamant indringlichaam met 136° hoek. Deze tester heeft een lichtmicroscoop met hoge resolutie en contrast met een vergroting van 400 ×. Inkepingen werden gemaakt met een snelheid van 20 s neerwaarts en een belasting van 10 g, 25 g en 50 g; en nooit dicht bij een rand van het preparaat of een andere inkeping. De minimale afstand tussen twee opeenvolgende inkepingen was groter dan 40 mm. Het aantal indrukkingen dat op een bepaalde plaats van de tand werd gemaakt, hing af van de dikte van het glazuur en het dentine op dat niveau. Daarom was dit aantal groter in de cuspzone dan in de cervicale zone (Fig. 2). Criteria voor het accepteren van een indrukking waren scherpte van de diagonale randen, uniformiteit van de diagonale vorm (geometrie) en vrij van onregelmatigheden in het testgebied. Bij longitudinale monsters werden de indrukkingen gemaakt van het buitenoppervlak van glazuur tot het binnenoppervlak van dentine, door EDJ heen in vijf zones: cervicaal, middelste derde, cusp, groef, en parallel aan occlusaal (Fig. 2). In transversale monsters werden ze gedaan in bucolingale tot mesiodistale richting (Fig. 1: A2).
De lengte van de assen van de kwadraatvormige indrukking (IL) werd afgelezen met de micrometerschaal die op het oculair van de hardheidsmeter was aangebracht, met een andere lichtmicroscoop (LM), en met SEM. De VHN-waarde werd verkregen uit tabellen. De gemiddelde waarde en SD werden berekend voor zowel IL als VHN. Kappa statistiek werd gebruikt om de betrouwbaarheid van de fout van de waarnemer bij het aflezen van IL te beoordelen. Er werd een Kappa waarde van 0,90 bereikt. Om fouten te verminderen, deed dezelfde waarnemer de aflezing. De Zeiss Axiotech LM en Jeol 5200 SEM microscopen werden gebruikt voor deze waarnemingen. De resultaten werden geanalyseerd door de diagonale indrukkinglengtes te vergelijken met de variantieanalyse ANOVA. Voor de chemische EDS-analyse werd een Philips XL30 SEM met een NORAN-EDS detector gebruikt.
3. Resultaten
Figuur 3 toont enkele van de belangrijkste indentatie onregelmatigheden geproduceerd in menselijke tanden wanneer sommige experimentele parameters niet adequaat zijn; zij zijn een aanwijzing dat de methode van monstervoorbereiding, of de belasting, en/of de positie van de indentatie niet de juiste zijn. Elk van deze onregelmatigheden verhindert de correcte meting van IL, en daarom, in dit werk, wanneer één van hen werd waargenomen, werd het monster niet gebruikt voor hardheidsmeting. In feite was de waarneming van één van deze onregelmatigheden voldoende om de voorbereiding en de experimentele procedures van het geanalyseerde monster opnieuw te controleren.
Figuur 4 toont de vorm van de VHN indrukkingen die voldoen aan alle eisen voor hardheidsmetingen. Figuur 4a toont een voorbeeld van indrukkingen die door de hele tanddikte in een slagtandmonster in de lengterichting zijn gemaakt. Figuur 4b toont enkele van de indrukkingen geproduceerd in glazuur, terwijl Fig. 4c er een toont in dentine. De vergroting in Fig. 4b en 4c is hetzelfde, zodat het verschil in hardheid tussen glazuur en dentine duidelijk is. Figuur 4 maakt ook de vergelijking mogelijk tussen de grootte van de inkeping en de grootte van de glazuurprisma’s: dit wijst op een oppervlak van de inkeping van 25 mm2.
Om indrukkingen zoals die in Fig. 3 te vermijden, werd de methode van monstervoorbereiding geperfectioneerd en de analyse met belastingen van 10 , 25 , en 50 g uitgevoerd. De gemiddelde waarden voor IL geproduceerd met deze belastingen in dezelfde zone en hun overeenkomstige VHN-waarden zijn weergegeven in tabel 1. Rekening houdend met de SD in elk geval, is de gelijkenis van de VHN-waarden in de geanalyseerde zone rechtlijnig. De SD voor belastingen van 10 en 50 g zijn echter groter dan die voor 25 g.
Collys et al.14 stelden een belasting van 50 g voor bij onderzoek naar de hardheid van tanden, omdat zij stelden dat lagere belastingen de grootte van de indrukking beïnvloeden. Zij gaven twee aspecten aan voor deze invloed van de belasting: 1) het oppervlak van het preparaat wordt veranderd tijdens het polijstproces, waardoor een coating ontstaat die groter is dan de grootste diepte die het indringlichaam bereikt; en 2) bij lagere belastingen neemt de moeilijkheid toe om de indrukkingstekens af te lezen. In dit werk hebben we echter, na de gevolgde prepareermethode, geen enkele coatinglaag waargenomen; hoewel de glazuur- en dentinestructuur altijd is waargenomen (Fig. 4). De diepte die bereikt werd met het gebruikte vierkante diamanten indringlichaam was ongeveer 2 mm. Bovendien vertoonden bij een belasting van 50 g bijna alle indrukkingen breuken en materiaalophopingen, zoals die in Fig. 3. Bij een belasting van 10 g waren de inkepingen zeer moeilijk leesbaar.
De hardheidswaarden verkregen met zowel 25 als 50 g waren statistisch gelijk, maar belasting van 25 g produceerde minder breukindicaties en betere indrukkingvormen. Daarom, na de analyse van Tabel 1, en rekening houdend met al het bovenstaande, werd de belasting van 25 g gekozen voor de hardheidsmetingen. Af en toe werden enkele lichte breuken waargenomen in de buitenste rand van de groefzone (zone 4) en in het middelste derde deel (zone 2), dicht bij het vestibulaire oppervlak, maar niet in een van de andere zones. Tijdstip van belasting aanbrengen is een andere parameter die we bestudeerden. McColm23 gaf aan dat 15 tot 30 s zeer aan te bevelen zijn voor keramische materialen. Daarom hebben we de belasting van 25 g gedurende 20 s voor deze studie toegepast.
Figuur 2 toont de verschillende niveaus van de menselijke tand waar de Vicker-hardheidsindentaties werden uitgevoerd. Tabel 2 toont de belangrijkste VHN waarden verkregen met de belasting van 25 g op de verschillende tand zones geëvalueerd. Uit deze tabel blijkt dat de zone die overeenkomt met de dwarsdoorsnede parallel aan occlusaal (zone 5) de grootste hardheidswaarden vertoonde, terwijl zone 1 (cervicaal) de laagste vertoonde. Merk echter op dat, rekening houdend met de SD waarden, het verschil in hardheid tussen zone 1 en zone 5 minimaal is. Tabel 3 toont de belangrijkste VHN-waarden verkregen uit de verschillende beoordeelde zones. Hier zien we dat de hardheid in glazuur hoger is dan in dentine, zoals verwacht, maar het blijft bijna constant in alle diktes van respectievelijk glazuur en dentine. Alleen dicht bij de EDJ is er een kloof waar de waarde afneemt van die van glazuur tot die van dentine.
Van de verkregen gegevens was de zone met de minimale VHN waarde zone 2 (het middelste derde) terwijl de grootste zone 5 was (parallel aan het occlusale). In het algemeen waren de inkepingen in de dwarsdoorsnede monsters gemakkelijker te lezen, met een zeer goede vorm en met minimale breukmarkering. In de langsdoorsnede daarentegen vertoonden de inkepingen enige indicatie van breuk, vooral die van zone 2. Statistisch gezien, toonden de resultaten verkregen door ANOVA significante verschillen (p > 0.05) tussen zone 5 en de andere. Hieruit wordt geconcludeerd dat zone 5 de significant grotere hardheidswaarde vertoonde, terwijl zone 1 de laagste vertoonde.
De chemische analyse door EDS gaf aan dat de Ca/P verhouding groter was in glazuur dan in dentine. In glazuur was deze ongeveer 1,63, vergeleken met 1,67 in zuiver hydroxyapatiet; dat wil zeggen, meer Ca dan P (Tabel 4). Na, Cl en Mg werden ook gedetecteerd24 (Fig. 5). In het algemeen vertoonden Na en Mg in glazuur een minimum aan het buitenoppervlak, maar stegen voortdurend tot aan de EDJ. Ca en P bleven bijna constant over de gehele dikte van het glazuur. Cl werd hoger gedetecteerd in het glazuur buitenoppervlak dan in EDJ. In dentine werd de verhouding Ca/P gevonden rond 1,5 (Tabel 4); dat wil zeggen, meer P in glazuur dan in dentine; Cl werd niet aangetroffen, Mg nam toe van EDJ tot het binnenoppervlak, en Na nam af op deze plaatsen (Fig. 5). Het is ook vermeldenswaard het gedrag van C en O: in dentine is het percentage van C en O hoger dan in glazuur. Dit is een aanwijzing voor een hoger gewichtspercentage organisch materiaal in dentine dan in glazuur, zoals bekend.
4. Discussie
Volgens onze resultaten is het Vicker indringlichaam nuttiger bij het onderzoek naar de hardheid van tanden dan het Knoop indringlichaam omdat een vierkante vorm altijd behouden moet blijven; en dicht bij het buitenoppervlak en de EDJ wordt een kleine uitrekking van de diagonalen van de indrukkingen, die fouten in de hardheidsmetingen veroorzaken, gemakkelijk ontdekt. Daarom stellen wij voor dat het Vicker indringlichaam altijd moet worden gebruikt bij de hardheidsstudies van tanden.
Wij vonden statistisch enig significant hardheidsverschil in dezelfde zone van de geanalyseerde gezonde tandmonsters, maar alleen tussen de verschillende zones van dezelfde tand zelf, volgens tabellen 2 en 3. Wij vonden hardheidswaarden in het bereik van 270 tot 360 VHN voor glazuur en van 50 tot 60 VHN voor dentine; de verschillen zijn afhankelijk van de beoordeelde zone. Deze resultaten zijn vergelijkbaar met die van Craig en Peyton13 , maar in ons geval zijn deze VHN-waarden constant over de gehele dikte van het glazuur en dentine voor elke evaluatiezone. Concluderend werd een lichte toename in hardheid waargenomen van zone 1 tot zone 5; dat wil zeggen, van de cervicale zone in longitudinale doorsnede tot de transversale doorsnede, parallel aan occlusaal.
Enkele auteurs21 hebben enige variaties in hardheid aangegeven vanaf het buitenoppervlak van de tand vergeleken met die plaatsen dicht bij EDJ, vergelijkbaar met die gerapporteerd in Tabel 2, maar zij hebben ook significante toenames in de SD waarden verkregen. Hoewel zij grotere VHN waarden rapporteerden voor het buitenoppervlak dan voor de EDJ, wat er op wijst, zoals Gustafson en Kling21, dat deze verschillen in hardheid worden veroorzaakt door de gerimpelde structuur die prisma’s aanwezig zijn in het buitenoppervlak. In dit werk bleven de hardheidswaarden statistisch gezien constant langs de dikte van respectievelijk glazuur en dentine, en ze veranderden alleen dicht bij de EDJ om natuurlijke redenen: er is een gat van ongeveer 20 mm voor en na de EDJ waar de indrukkingvorm enkele van de onregelmatigheden vertoont die in Fig. 3 zijn aangegeven. Dit geeft aanleiding tot lagere hardheidswaarden, zoals die welke zij rapporteerden. Wij besloten deze waarden niet in onze metingen op te nemen omdat zij niet voldeden aan alle eisen om geaccepteerd te worden voor een Vicker hardheidsanalyse.
Het is duidelijk dat het VHN-verschil tussen glazuur en dentine het resultaat is van het verschil in het gehalte aan organische en anorganische materialen, zoals algemeen bekend is. Echter, volgens onze resultaten worden de VHN gevonden in glazuur en dentine zelf niet beïnvloed door de aanwezigheid van de minder belangrijke elementen Na, Cl en Mg, zoals sommige auteurs hebben aangegeven18-22, maar alleen voor het percentage van mineralisatie in deze weefsels.
5. Conclusies
De Vicker hardheidswaarden van de tand vertonen statistisch geen verandering van het buitenste glazuuroppervlak naar EDJ, en van EDJ naar het binnenste dentine oppervlak; zij blijven constant over de gehele glazuur- en dentine dikte in het geanalyseerde gebied. De hardheid is alleen groter langs de transversale doorsnede dan langs de longitudinale doorsnede, en iets groter van zone 1 tot zone 5. Het VHN verschil tussen glazuur en dentine is een resultaat van het percentage mineralisatie dat zij vertonen.
Acknowledgements
3. Kinney, J.H.; Balooch, M.; Marshall, S.J.; Marshall. G.W.; Weihs, T.P. Archs Oral Biol., v. 41, p. 9-13, 1996.
4. Meredith, N.; Sherriff, M.; Setchell, D.J.; Swanson, S.A.V. Archs, Oral Biol. v. 41, p. 539-545, 1996.
5. Marshall, G.W. Quintessence Int. v. 24, p. 606-617, 1993.
6. Fosse, G.; Saele, P.K.; Eibe, R. Acta Odontol. Scand, v. 50, p. 201-210, 1992.
7. Garberoglio, R.; Brannstrom, M. Archs Oral Biol., v. 21, p. 355-362, 1976.
8. Stephen, N.; Wei, H.Y.; Koulourides, V. J. Dent. Res., v. 51, p. 648-651, 1972.
9. Taketa, F.; Perdue, H.S.; O’Rourke, W.F.; Sievert, H.W.; Phillips, P.H. J. Dent. Res., v. 36, p. 739-742, 1957.
10. Totah, V.P. J. Dent. Res., v. 21, p. 99-104, 1942.
11. Caldwell, R.C.; Muntz, M.L.; Gilmore, R.; Pigman, W. J. Dent. Res., v. 36, p. 732-737, 1957.
12. Sweeney, W.T. J. Dent. Res., v. 21, p. 303-310, 1942.
13. Craig, R.G.; Peyton, F.A. J. Dent. Res., v. 37, p.661-668, 1958.
14. Collys, K.; Slop, D.; Cleymaet, R.; Coomanss, D.; Michotte, Y. Dent Mater., v. 8, p. 332-335, 1992.
15. Ryge, G.; Foley, D.E.; Fairhurst, C.W. J. Dent. Res. v. 40, p. 1116-1121, 1961.
16. Wilson, T.G.; Love, B. Am. J. Orth. and Dentofacial Orthop, v. 107, p. 379-381, 1995.
17. Gaspersic, D. J. Oral Pathol. Med., v. 24, p.153-158, 1995.
18. Robinson, C.; Weatherell, J.A.; Hallsworth, A.S. Caries Res., v. 15, p. 70-77, 1981.
19. Kodaka, T.; Debari, K.; Yamada, M.; Kuroiwa, M. Caries Res., v. 26, p. 139-141, 1992.
20. Davidson, C.L.; Hoekstra, I.S.; Arends, J. Caries Res., v. 8, p. 135-144, 1974.
21. Gustafson, G.; Kling, O. Odontol. Tskr., v. 56, p. 23-30, 1948.
22. Herkströter, F.M.; Witjes, M.; Ruben, J.; Arends, J. Caries Res., v. 23, p. 342-344, 1989.
23. McColm, I.J. Introduction and overview in ceramic hardness, Plenum Press, New York, 1990.
24. Robinson, C.; Weatherell, J.A.; Hallsworth, A.S. Caries Res., v. 15, p. 70-77, 1981.