A texasi San Marcosban található Southwest Texas State University elvégzése után Boothe csatlakozott az Oregoni Shakespeare Fesztivál repertoártársulatához, szerepelt többek között a IV. Henrik, 2. rész (IV. Henrik angol király megformálásában), a Troilus és Cressida című darabokban. A New York-i színpadon 1974-ben debütált a Lincoln Centerben a III. Richárd című előadásban. Öt évvel később debütált a Broadway színházban a James McLure által írt Lone Star című egyfelvonásosban.
Boothe először 1980-ban került az országos figyelem középpontjába, amikor Jim Jones-t alakította a CBS TV Guyana Tragedy című filmjében: Jim Jones története című filmben. Boothe alakítása az őrült szektavezérről a kritikusok elismerését kapta. A Time a produkcióról szóló cikkében Boothe-t dicsérte: “Van egy rendkívüli alakítás. Egy fiatal színész, Powers Boothe megragadja ‘Apa’, Jim Jones minden karizmáját és gonoszságát”. Boothe Emmy-díjat nyert a szerepéért, megelőzve a veterán Henry Fondát és Jason Robardsot. Mivel 1980 őszén a Screen Actors Guild sztrájkolt, ő volt az egyetlen színész, aki átment a sztrájkvonalakon, hogy részt vegyen a ceremónián, és akkor azt mondta: “Ez lehet, hogy vagy karrierem legbátrabb pillanata, vagy a legostobább.”
Boothe alakította Philip Marlowe-t egy Raymond Chandler novelláin alapuló tévésorozatban az HBO számára az 1980-as években. Olyan filmekben szerepelt, mint a Southern Comfort, A Breed Apart, a Red Dawn, a The Emerald Forest, a Rapid Fire és az Extreme Prejudice, valamint az HBO Into the Homeland és a By Dawn’s Early Light című filmekben. Emellett szerepelt az 1990-es CBS-TV Family of Spies című filmjében, amelyben az áruló John Walker tengerésztisztet alakította. Boothe alakította Curly Bill Brocius-t az 1993-as Tombstone című westernben, a Blue Sky című filmben a hadsereg hűtlen főtisztjét (Jessica Lange Oscar-díjas alakításával szemben), a Sudden Death című filmben pedig a baljós terrorista főszereplőt. Oliver Stone Nixon (Alexander Haig vezérkari főnökeként) és U Turn (a városi seriff szerepében) című filmjeiben is szerepelt.
2001-ben az Attila című televíziós minisorozatban Flavius Aëtius, a hun invázió megállításáért felelős római tábornok szerepét játszotta. Boothe szerepelt az HBO Deadwood című sorozatában Cy Tolliver bordélyház-tulajdonosként, valamint a bűnös Roark szenátorként a Sin City (2005) című mozifilmben, illetve annak folytatásában, a Sin Cityben: A Dame to Kill For (2014) című filmben. Ő a hangja a 2005-ös Area 51 című videojáték egyik szereplőjének, valamint Gorilla Grodd-nak, a hiperintelligens telepatikus főgonosznak az Igazság Ligájában és az Igazság Ligája Unlimitedben. Ő adta a hangját a 2008-as Turok című videojátékban a gonosztevőnek, Kane-nek.
Különleges vendégszereplő volt a 24 című sorozatban, ahol Noah Daniels alelnököt alakította. Visszatért a hetedik évad előzménysorozatában, a 24: Redemptionben. Rögtön azután, hogy átvette a megbízott elnök szerepét, Boothe látható, amint kilép a kettes légierőből, a háttérben F-15-ösökkel. Boothe egy lezuhant F-15-ös pilótát játszott a Vörös hajnalban. 2008 márciusában John McCain szenátor elnökválasztási kampányának televíziós kampányhirdetését narrálta.
2012-ben Boothe feltűnt Joss Whedon The Avengers című filmjében egy titokzatos szerepben, mint egy árnyékos kormányzati felettes S.H.H.I.E.L.D. 2015-16-ban az ABC Agents of S.H.I.E.L.D.
Boothe a 2012-es Hatfields & McCoys című minisorozatban Valentine “Wall” Hatfield bíró szerepében tűnt fel. Boothe szintén szerepet kapott Lamar Wyatt szerepében az ABC Nashville című zenés drámasorozatában. Boothe kölcsönözte a hangját az IO Interactive által fejlesztett Hitman: Absolution című 2012-es videojátékhoz is, Benjamin Travis karakterének hangját adta.