Um forte argumento de que o novo retrovírus humano XMRV não é um contaminante de laboratório é a descoberta de que o DNA viral está integrado no DNA cromossómico dos tumores da próstata. Porque é que este resultado constitui uma prova tão forte de infecção viral?
A criação de uma cópia integrada do genoma viral – o provírus – é um passo crítico no ciclo de vida dos retrovírus. O DNA proviral é transcrito pela RNA polimerase II celular para produzir o genoma do RNA viral e os mRNAs necessários para completar o ciclo de replicação. Sem DNA proviral, a replicação retroviral não pode prosseguir.
Para produzir DNA proviral, o genoma do RNA retroviral é convertido em um DNA de dupla cadeia pela enzima viral transcriptase reversa. Esta etapa ocorre no citoplasma. Specific e efficient a inserção do DNA viral no DNA da célula hospedeira é catalisada por uma enzima viral chamada integrase. Esta enzima reconhece e corta as duas extremidades do DNA viral, e os novos finais 3′ são então unidos covalentemente ao DNA hospedeiro em cortes escalonados feitos pela integrase.
A imagem abaixo mostra algumas das características da integração retroviral. O topo é o ADN linear não integrado do vírus do sarcoma/leucose aviária produzido por transcrição reversa. Após a conclusão da integração, dois pares de bases (AA-TT) são perdidos de ambos os termini, e um local alvo de 6-bp no DNA hospedeiro (rosa) é duplicado em ambos os lados do DNA proviral. Este local alvo varia em comprimento de 4 a 6 bp entre diferentes retrovírus. O DNA proviral (meio) termina com a sequência conservada 5′-T G…C A-3′. O provírus serve como modelo para a produção do genoma do RNA viral (inferior).
Para identificar o DNA proviral XMRV, o DNA genômico foi isolado de tumores da próstata, e o DNA foi amplificado usando um primer que recozeu no gene do env viral, perto do LTR do lado direito. A análise da sequência nucleotídica dos DNAs amplificados de 14 9 pacientes diferentes mostrou a sequência viral CA esperada seguida pelo ADN humano. Contudo, o outro sinal cardinal de integração retroviral – duplicação de sequências de ADN hospedeiro em flanco do local de integração – não pôde ser confirmado, porque apenas o local de integração à direita foi estudado.
O isolamento de todo o ADN proviral, incluindo ambos os locais de integração em flanco, de pacientes com cancro da próstata ou síndrome de fadiga crónica seria uma evidência adicional de que o XMRV é um vírus que infecta humanos.