Valmistuttuaan San Marcosissa, Texasissa sijaitsevasta Southwest Texas State Universitystä Boothe liittyi Oregon Shakespeare Festivalin repertuaariryhmään, jonka rooleja hän esitti muun muassa elokuvissa Henrik IV:n osa 2 (Englannin Henrik IV:n kuvaajana), Troilus ja Cressida. Hänen New Yorkin näyttämödebyyttinsä oli vuonna 1974 Lincoln Centerin tuotannossa Richard III. Viisi vuotta myöhemmin hänen Broadway-teatteridebyyttinsä tapahtui pääosassa James McLuren kirjoittamassa yksinäytöksisessä näytelmässä Lone Star.
Boothe nousi ensimmäisen kerran kansalliseen tietoisuuteen vuonna 1980, kun hän esitti Jim Jonesia CBS-TV:n elokuvassa Guyana Tragedy: The Story of Jim Jones. Boothen kuvaus hullusta kulttijohtajasta sai kriitikoiden suosiota. Time-lehden tuotannosta kertovassa jutussa Boothea ylistettiin: ”On yksi poikkeuksellinen suoritus. Nuori näyttelijä nimeltä Powers Boothe vangitsee ’isän’ Jim Jonesin kaiken karisman ja pahuuden.” Boothe voitti roolistaan Emmy-palkinnon voittaen veteraanit Henry Fondan ja Jason Robardsin. Kun Screen Actors Guild oli lakossa syksyllä 1980, hän oli ainoa näyttelijä, joka ylitti lakkolinjat osallistuakseen seremonioihin, ja sanoi tuolloin: ”Tämä saattaa olla joko urani rohkein hetki tai tyhmin.”
Boothe esitti Philip Marlowea Raymond Chandlerin novelleihin perustuvassa televisiosarjassa HBO:lle 1980-luvulla. Hän esiintyi muun muassa elokuvissa Southern Comfort, A Breed Apart, Red Dawn, The Emerald Forest, Rapid Fire ja Extreme Prejudice sekä HBO:n elokuvissa Into the Homeland ja By Dawn’s Early Light. Lisäksi hän esiintyi vuonna 1990 CBS-televisioelokuvassa Family of Spies, jossa hän esitti petturina laivaston upseeria John Walkeria. Boothe näytteli Curly Bill Brociusta vuoden 1993 hittiwesternissä Tombstone, epälojaalia armeijan johtavaa upseeria elokuvassa Blue Sky (vastapäätä Jessica Langen Oscar-palkittua suoritusta) ja synkkää johtavaa terroristia elokuvassa Sudden Death. Hän kuului myös Oliver Stonen elokuvien Nixon (esikuntapäällikkönä Alexander Haig) ja U Turn (kaupungin sheriffinä) suuriin näyttelijäkaartiin.
Vuonna 2001 hän näytteli Flavius Aëtiusta, roomalaista kenraalia, jonka tehtävänä oli pysäyttää hunnien hyökkäys televisiolle tehdyssä minisarjassa Attila. Boothe näytteli bordellinomistaja Cy Tolliverin roolia HBO:n sarjassa Deadwood ja rähjäistä senaattori Roarkia elokuvassa Sin City (2005) sekä sen jatko-osassa Sin City: A Dame to Kill For (2014). Hän on vuonna 2005 ilmestyneen Area 51 -videopelin yhden hahmon ja Gorilla Groddin, hyperälykkään telepaattisen superpahiksen ääni elokuvissa Justice League ja Justice League Unlimited. Hän ääninäytteli pahista Kanea vuonna 2008 ilmestyneessä Turok-videopelissä.
Hän oli vierailevana tähtenä 24-sarjassa, jossa hän esitti varapresidentti Noah Danielsia. Hän palasi seitsemännen kauden esiosassa 24: Redemption. Heti sen jälkeen, kun Boothe oli ottanut vastaan vt. presidentin roolin, hänet nähdään poistumassa Air Force Two:sta, jonka taustalla näkyy F-15-koneita. Boothe näytteli pudonnutta F-15-lentäjää elokuvassa Red Dawn. Maaliskuussa 2008 hän kertoi senaattori John McCainin presidentinvaalikampanjan televisiokampanjamainoksen.
Vuonna 2012 Boothe esiintyi Joss Whedonin The Avengers -elokuvassa salaperäisessä roolissa hämäräperäisenä hallituksen esimiehenä S.H.H.I.E.L.D. Vuosina 2015-16 hän toisti roolin, nyt nimellä Gideon Malick, ABC:n Agents of S.H.I.E.L.D:ssä.
Boothe esiintyi vuonna 2012 minisarjassa Hatfields & McCoys tuomari Valentine ”Wall” Hatfieldinä. Boothe oli myös valettu Lamar Wyattin rooliin ABC:n musiikkidraamasarjassa Nashville. Boothe lainasi äänensä myös IO Interactiven kehittämässä Hitman: Absolution -videopelissä vuodelta 2012 äänestäen Benjamin Travisin hahmoa.