Et stærkt argument for, at det nye humane retrovirus XMRV ikke er en laboratoriekontaminant, er fundet af, at viralt DNA er integreret i kromosomalt DNA i prostatatumorer. Hvorfor udgør dette resultat et så stærkt bevis for viral infektion?
Etablering af en integreret kopi af det virale genom – provirusset – er et kritisk skridt i retrovirussernes livscyklus. Proviral DNA transskriberes af cellulær RNA-polymerase II for at producere det virale RNA-genom og de mRNA’er, der er nødvendige for at fuldføre replikationscyklussen. Uden proviralt DNA kan retroviral replikation ikke fortsætte.
For at fremstille proviralt DNA omdannes det retrovirale RNA-genom til et dobbeltstrenget DNA af det virale enzym reverse transkriptase. Dette trin finder sted i cytoplasmaet. Specifik og efficient indsættelse af det virale DNA i værtscellens DNA katalyseres af et viralt enzym kaldet integrase. Dette enzym genkender og skærer de to ender af viralt DNA ind, og de nye 3′-ender forbindes derefter kovalent med værts-DNA’et ved forskudte indskæringer foretaget af integrase.
Det nedenstående billede viser nogle af de karakteristiske træk ved retroviral integration. Øverst ses det uintegrerede lineære DNA af aviær sarkom/leukosevirus fremstillet ved omvendt transskription. Når integrationen er afsluttet, forsvinder to basepar (AA-TT) fra begge terminaler, og et 6-bp-målsted i værts-DNA (lyserødt) duplikeres på hver side af det provirale DNA. Dette målsted varierer i længde fra 4 til 6 bp blandt forskellige retrovirusser. Det provirale DNA (midten) slutter med den bevarede 5′-T G…C A-3′-sekvens. Proviret tjener som skabelon til fremstilling af det virale RNA-genom (nederst).
For at identificere XMRV proviral DNA blev genomisk DNA isoleret fra prostatatumorer, og DNA’et blev amplificeret ved hjælp af en primer, der annealerede i det virale env-gen, nær det højre LTR. Nukleotidsekvensanalyser af amplificerede DNA’er fra 14 9 forskellige patienter viste den forventede virale CA-sekvens efterfulgt af humant DNA. Det andet kardinaltegn på retroviral integration – duplikation af værts-DNA-sekvenser, der flankerer integrationsstedet – kunne imidlertid ikke bekræftes, fordi kun det højre integrationssted blev undersøgt.
Der ville være yderligere bevis for, at XMRV er et virus, der inficerer mennesker.
Isoleringen af hele det provirale DNA, herunder begge flankerende integrationssteder, fra patienter med prostatakræft eller kronisk træthedssyndrom ville være yderligere bevis for, at XMRV er et virus, der inficerer mennesker.