Armazenamento de tecido FFPE
Amostras de FFPE podem ser armazenadas em hospitais, biobancos e centros de pesquisa. As instalações de armazenamento frequentemente mantêm registros de como o tecido foi coletado, os procedimentos de preservação e informações demográficas (tais como, mas não limitadas também: a origem, duração, idade, etnia, sexo e estágio da doença) do doador. As informações demográficas são um fator importante na pesquisa e em ensaios clínicos. Amostras de FFPE que são devidamente preservadas são muito valiosas e podem ser armazenadas à temperatura ambiente por um longo período de tempo.
Aplicações
Amostras de FFPE são importantes, pois são frequentemente usadas em:
a) Imunohistoquímica
As amostras de FFPE seccionadas são montadas numa lâmina, banhadas numa solução contendo anticorpos, e depois coradas para que possam ser mais claramente vistas. Este método é importante para médicos e pesquisadores que procuram patologia no tecido como Alzheimer ou câncer.
b) Oncologia
As amostras de FFPE são vitais no campo da oncologia, pois os tecidos tumorais têm morfologias características que permitem aos pesquisadores procurar certas proteínas. Estas proteínas são então utilizadas para ajudar na avaliação do tratamento e diagnóstico.
c) Hematologia
No estudo do sangue e seus distúrbios, as amostras de FFPE são importantes na determinação das anomalias e na descoberta de curas. As amostras podem ser utilizadas em estudos relacionados com a regeneração dos tecidos, genética e toxicologia.
d) Imunologia
Amostras de FFPE de um doador com doença auto-imune ajuda a determinar a causa e o desenvolvimento da terapia para a doença.
Complicações ou Limitações
Uma das possíveis limitações do processo de fixação usando formalina é a potencial desnaturação das proteínas que estão presentes no tecido tornando-as indetectáveis aos anticorpos. Para compensar este problema, foram desenvolvidas técnicas de recuperação de antigénios. A técnica de recuperação de antígenos recupera especificamente DNA, RNA e proteínas de amostras de FFPE. Para que este método funcione, a qualidade das amostras de FFPE é crítica. Há também a questão de não haver um procedimento padrão a ser utilizado no processamento pré-analítico, como a fixação e o isolamento do DNA. Isto significa que pequenas diferenças, como o uso diferente de instrumentos, manipulação de amostras e metodologia, podem resultar em variações que afetam a qualidade do DNA e os resultados dos estudos. Alguns dos fatores que foram encontrados para afetar os resultados do estudo de amostras de FFPE são:
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Registo exacto do protocolo de fixação
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Variação no tempo de fixação
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Temperatura durante fixação
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Condições de armazenamento de amostras de FFPE
Controle de qualidade
Para garantir a mais alta qualidade das amostras de FFPE, aqueles que recolhem e armazenam estas amostras devem:
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Sigam os padrões éticos e legais.
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Certifique-se de ter um registo claro e preciso dos doadores.
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Dar informações sobre o processo de amostragem e coleta
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Ser supervisionado por um patologista licenciado durante a coleta de amostras
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Disponibilizar uma cadeia completa de custódia
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Trabalhar somente com uma rede cuidadosamente selecionada de distribuidores que consistentemente fornecem amostras de alta qualidade e precisão
Tecido congelado fresco
Tecidos congelados frescos são amostras que são preservadas usando nitrogênio líquido através de um método conhecido como “flash freezing”. Estes espécimes são então armazenados num congelador que é colocado a uma temperatura inferior a -80 graus Celsius. O tecido fresco congelado tem aplicações diferentes das amostras de FFPE, pois podem ser usadas em estudos de morfologia nativa ou análise molecular também.
Amostras de FFPE Vs. Tecido fresco congelado
FFPE e o tecido fresco congelado tem seus prós e contras. São dois tipos diferentes de amostras que têm usos diferentes, dependendo das exigências da pesquisa ou estudo clínico.
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Os blocos de FFPE são muito duros e podem ser facilmente armazenados à temperatura ambiente por décadas sem a necessidade de equipamentos especiais, tornando o tipo de amostra de tecido muito econômico.
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Existe um grande arquivo de amostras de FFPE disponível para pesquisadores devido à facilidade associada ao seu armazenamento.
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As amostras de FFPE têm sido utilizadas por décadas tornando-o incrivelmente familiar aos patologistas.
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O tecido fresco congelado é muito mais adequado para a análise de proteínas nativas, reação em cadeia da polimerase e seqüenciamento de DNA da próxima geração.
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O tecido fresco congelado garante a preservação do DNA, RNA e proteínas nativas.
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Os tecidos frescos congelados requerem equipamento especializado para o armazenamento. Isto significa falha mecânica, falta de energia e descuido podem afetar a qualidade das amostras.
1) Ward T. A importância da fixação adequada de formalina de amostras de FFPE. Personalis. Acesso 6/19/2018. https://www.personalis.com/importance-proper-formalin-fixation-ffpe-specimens/
2) Doiron L. 5 regras de controle de qualidade para bancos de tecido cancerígeno. Folio Conversant. Acessado em 19/06/2018. http://www.conversantbio.com/blog/bid/339034/5-Quality-Control-Rules-for-Cancer-Tissue-Banks
3) FFPE vs amostras de tecido congelado. BioChain. Acessado em 19/06/2018. https://www.biochain.com/general/ffpe-vs-frozen-tissue-samples/
4) O que é tecido FFPE e quais são os seus usos. BioChain. Acessado em 19/06/2018. https://www.biochain.com/general/what-is-ffpe-tissue/