Un argumento de peso para demostrar que el nuevo retrovirus humano XMRV no es un contaminante de laboratorio es el hallazgo de que el ADN viral está integrado en el ADN cromosómico de los tumores de próstata. ¿Por qué este resultado constituye una prueba tan sólida de la infección viral?
El establecimiento de una copia integrada del genoma viral -el provirus- es un paso crítico en el ciclo vital de los retrovirus. El ADN proviral es transcrito por la ARN polimerasa II celular para producir el genoma de ARN viral y los ARNm necesarios para completar el ciclo de replicación. Sin el ADN proviral, la replicación retroviral no puede continuar.
Para producir el ADN proviral, el genoma de ARN retroviral se convierte en un ADN de doble cadena mediante la enzima viral transcriptasa inversa. Este paso ocurre en el citoplasma. La inserción específica y eficiente del ADN viral en el ADN de la célula huésped es catalizada por una enzima viral llamada integrasa. Esta enzima reconoce y corta los dos extremos del ADN viral, y los nuevos extremos 3′ se unen covalentemente al ADN del huésped en cortes escalonados hechos por la integrasa.
La imagen siguiente muestra algunos de los rasgos característicos de la integración retroviral. En la parte superior está el ADN lineal no integrado del virus del sarcoma/leucosis aviar producido por transcripción inversa. Al completarse la integración, se pierden dos pares de bases (AA-TT) de ambos extremos, y se duplica un sitio diana de 6 pb en el ADN del huésped (rosa) a cada lado del ADN proviral. Este sitio objetivo varía en longitud de 4 a 6 pb entre los diferentes retrovirus. El ADN proviral (centro) termina con la secuencia conservada 5′-T G…C A-3′. El provirus sirve como plantilla para la producción del genoma del ARN viral (abajo).
Para identificar el ADN proviral del XMRV, se aisló el ADN genómico de los tumores de próstata y se amplificó el ADN utilizando un cebador que se anuda en el gen env viral, cerca de la LTR derecha. Los análisis de la secuencia de nucleótidos de los ADNs amplificados de 14 9 pacientes diferentes mostraron la secuencia viral CA esperada, seguida del ADN humano. Sin embargo, el otro signo cardinal de la integración retroviral -la duplicación de las secuencias de ADN del huésped que flanquean el sitio de integración- no pudo confirmarse, porque sólo se estudió el sitio de integración derecho.
El aislamiento de todo el ADN proviral, incluidos los dos sitios de integración que lo flanquean, de pacientes con cáncer de próstata o síndrome de fatiga crónica sería una prueba adicional de que el XMRV es un virus que infecta a los humanos.